肝星狀細胞（HSCs）作為肝臟纖維化研究的核心，其體外培養的成敗直接影響實驗結果的可靠性。盡管肝星狀細胞培養試劑盒大大簡化了分離與培養流程，但在實際操作中仍可能遭遇問題。掌握
肝星狀細胞培養試劑盒的常見問題應對策略，是確保細胞活力與實驗順利的關鍵。
問題一：細胞得率低，分離不充分
原因分析：組織消化不全或梯度離心條件不當，導致HSCs未能有效釋放或分離。
解決方法：優化消化時間與酶濃度，確保組織充分分散但不過度損傷細胞；檢查梯度液密度是否準確配制，離心力與時間是否符合說明書要求；確保吸取界面層時動作輕柔，避免擾動其他細胞層。
問題二：細胞純度不高，混雜其他細胞
原因分析：密度梯度分離不全，或試劑盒分離體系對物種/組織適應性不足。
解決方法：可嘗試優化梯度層數或調整離心參數；進行選擇性貼壁：HSCs貼壁較快，可在接種后1-2小時更換培養基，去除未貼壁的血細胞或Kupffer細胞；必要時結合免疫磁珠分選等后續純化手段。
問題三：細胞貼壁差，死亡率高
原因分析：培養瓶未預涂基質（如膠原）、培養基成分不適宜或操作過程中機械損傷。
解決方法：確保培養瓶預先用試劑盒推薦的包被液處理；檢查培養基是否新鮮配制，血清質量是否合格；消化和吹打時動作輕柔，避免氣泡產生；接種后48小時內不擾動細胞。
問題四：細胞活化過快，失去靜息表型
原因分析：HSCs在體外易自發活化，表現為由圓形發亮轉變為梭形肌成纖維樣，脂滴減少。
解決方法：使用低氧條件（如5%O2）或添加抑制劑（如抗氧化劑）延緩活化；避免過度傳代；若需研究靜息態HSCs，建議盡早進行實驗或采用特殊維持培養基。
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更新時間：2025-09-08
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